靶向GD2CART细胞治疗为儿童神经

▎创新中心/报道

神经母细胞瘤是婴幼儿最常见的颅外实体肿瘤，占儿童恶性肿瘤的8%～10%。神经母细胞瘤来源于未分化的交感神经节细胞，肾上腺是最常见的原发部位，其次是腹部交感神经节、胸部交感神经节、颈部交感神经节和盆腔交感神经节等。儿童神经母细胞瘤治疗难度大、大多数肿瘤具有很强的侵袭性，恶性程度高，也被称为“儿童肿瘤之王”。高危神经母细胞瘤5年生存率仅为15%。

图1.神经母细胞瘤在儿童患者中的分布

目前对儿童神经母细胞瘤的治疗手段包括手术切除、化疗、干细胞移植、放疗和抗体治疗。年11月ScienceTranslationalMedicine上刊登了一项来自英国伦医院的基于具有CD28/CD3ζ信号域的二代GD2-CAR-T（后文称为“RQR8/GD2CAR-T细胞”，缩写为1RG-CAR-T）细胞治疗的临床研究，为神经母细胞瘤的治疗贡献了新的经验。

在CAR-T细胞疗法中，T细胞经过基因改造后在它们的表面上表达一种称为嵌合抗原受体（CAR）的分子，可以特异性识别癌细胞。双唾液酸神经节苷脂GD2是基于CAR-T疗法的引人注目的靶标。GD2抗原在各种神经外胚层肿瘤和肉瘤中高度表达，包括神经母细胞瘤、黑色素瘤和骨肉瘤等肿瘤。

研究人员使用中等亲和力的人源GD2抗体K的scFv（单链可变片段）构建CAR结构的抗原识别结构域，通过人免疫球蛋白G1（IgG1）Fc间隔区连接至CD28/CD3-ζ胞内结构域。基因表达盒中还插入了RQR8“自杀基因”，该基因由结合抗CD20抗体利妥昔单抗的两个表位（图2中红色）和结合抗CD34抗体QBEnd10的一个表位（图2中蓝色，用于分析检测目的）组成。抗CD20抗体利妥昔单抗与CD20表位的结合引起高效的补体介导的细胞杀伤。在临床毒性无法控制的情况下，可通过给予利妥昔单抗清除1RG-CAR-T。

图2.1RG-CAR-T设计

GD2-CAR（嵌合抗原受体）包含人源抗GD2抗体K的scFv，它与人免疫球蛋白IgG1铰链和Fc区相连。为避免表达IgGFc受体（FcγR）的先天免疫细胞与CH2CH3意外结合，对IgG1-FcγR相互作用所需的基本结合序列进行了突变改造。CAR的细胞外结构域与跨膜结构域融合，而CD28胞内结构域顺式连接至CD3ζ。RQR8“自杀”基因与GD2-CAR共表达。

研究人员在针对复发/难治性神经母细胞瘤的I期临床研究（NCT）中考察了是否可以制造出1RG-CAR-T细胞，以及它们能否在受试者体内扩增。研究还探究1RG-CAR-T细胞是否引起免疫激活或靶向毒性，以及是否产生任何抗肿瘤活性。

在12例患有复发/难治性神经母细胞瘤的儿童进行了治疗过程中，输注的靶向GD2的二代CAR-T细胞剂量不断增加，预先给予的淋巴细胞耗竭处理的强度也同样增加。研究结果显示：在CAR-T细胞输注后第28天，虽然在标准放射反应标准下，没有患者出现临床客观反应；但是在氟达拉滨/环磷酰胺的化疗预处理后接受剂量≥/m2CAR-T细胞的6名患者中：2名患者经历了2~3级细胞因子释放综合征；3名患者表现出软组织和骨髓疾病的消退。这些数据证明了CAR-T治疗抗肿瘤活性，且没有显示出肿瘤外靶向毒性。

论文共同作者英国癌症研究中心医学顾问SueBrook博士说，“患有像神经母细胞瘤这样难以治疗的癌症的儿童的治疗方案非常有限，当癌症复发时情况就更加困难。GD2CAR-T细胞治疗的早期结果看起来很有希望，特别是在没有产生靶向GD2的抗体疗法产生的神经毒性的情况下观察到这种活性。”就目前研究所得而言，用GD2CAR-T细胞靶向治疗神经母细胞瘤似乎是一种有效且安全的策略，但需要进一步修饰以延长CAR-T细胞的寿命。

参考文献：

1.Antitumoractivitywithouton-targetoff-tumortoxicityofGD2-chimericantigenreceptorTcellsinpatientswithneuroblastomaStraathofetal.,Sci.Transl.Med.12,eabd()25November

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